一、高壓滅菌鍋使用前要水加到水位線；

二、將需滅菌的培養基、蒸餾水或其它器皿放入滅菌鍋內，關閉鍋蓋，檢查排氣閥、安全閥狀態（上下排氣閥打開安全閥關合然后加熱，方便空氣排出，上、下排氣閥都同時處于開啟狀態待有水蒸汽從上、下閥溢出，此狀態保持7、8分鐘后，即排出空氣后 上排氣閥關合 下排氣閥調小 安全閥保持關合狀態 ），

三、打開電源，檢查參數設置是否正確，然后按下“work”鍵，滅菌鍋開始工作；自動派冷氣，到105℃時，底部排氣閥門自動關閉，然后壓力開始上升；

四、壓力升至 0.15MPa（121℃）時，滅菌鍋再次自動放氣，然后開始記時，一般培養基滅菌20min，蒸餾水滅菌30min；

五、達到規定的滅菌時間后，關閉電源，打開放氣閥緩慢放氣；當壓力指針降至 0.00MPa時，放氣閥無蒸汽排除時，方可開啟鍋蓋。

六、注意事項

1、汽未放盡前，不得開啟高壓鍋；

2、如果滅菌后的培養基在鍋內不及時拿出，需在蒸汽放盡后將鍋蓋打開，切忌將培養基封閉在鍋內過夜。

3、壓力表指針在0.05MPa以上時，不能過快放汽，以防止壓力急速下降，液體滾沸，從培養容器中溢出。

4、操作過程，請注意安全，小心燙傷。

    在一個標準大氣壓下水的沸點是100攝氏度 壓力越高,與之對應壓力下的沸點越高 這里是高壓蒸汽鍋,說明壓力肯定大于一個標準大氣壓(通常情況下的地表面的大氣壓強就認為是一個標準大氣壓),也就是說高壓蒸汽鍋肯定要超過100攝氏度才能沸騰,才能產生蒸汽. 至少要等到水煮沸，排出一分鐘左右的蒸汽后再把安全閥關閉，這樣可以使高壓蒸汽鍋里的壓力迅速上升,原來沸騰的水因為壓力的快速上升而停止沸騰,壓力大,沸點高,水蒸汽就變成液體水,而放出大量的汽化潛熱,就是高溫高壓的目的，從而達到殺菌的目的 原理在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大，其原因有三：

一是濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質較易凝固，因蛋白質含水量增加，所需凝固溫度降低，

二是濕熱的穿透力比干熱大；

三是濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100℃時，由氣態變為液態時可放出2．26kJ（千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。

    在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內冷空氣的排除是否*極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當水蒸汽中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。 如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而發生污染。 要100度以上,也就是對應壓力下的沸點后才能使水劇烈沸騰,將鍋內空氣更多的排除.