紫外分光光度計,就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段,常用來檢定物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照、比較較大吸收波長吸收系數(shù)的一致性和純度檢驗(yàn)。
紫外分光光度計的測量依據(jù):
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會相同。因此,每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
又因?yàn)樵S多物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)有特征吸收峰,所以可用紫外分光光度法對這些物質(zhì)分別進(jìn)行測定(定量分析和定性分析)。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。
朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律,俗稱光吸收定律,是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。當(dāng)入射光波長一定時,溶液的吸光度A是吸光物質(zhì)的濃度C及吸收介質(zhì)厚度l(吸收光程)的函數(shù)。
先確定實(shí)驗(yàn)條件,并在此條件下測得標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的吸收峰以及其對應(yīng)波長值(同時可獲得該物質(zhì)的較大吸收波長);再在選定的波長范圍內(nèi)(或較大波長值處),分別以(不同濃度)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度和溶液濃度為橫、縱坐標(biāo)繪出化合物溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到其所對應(yīng)的數(shù)學(xué)方程;接著在相同實(shí)驗(yàn)條件下配制待測溶液,測得待測溶液的吸光度,然后用已獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出待測溶液中所需測定的化合物的含量。
凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物,根據(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度,可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。